Vmax/Km，Vmax，Km

逸云801 · 发表于 2012-12-26 14:47:38

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在一级反应中，米氏方程V＝S*Vmax/（Km+S），通过双倒数法作图(1/V-1/S)得到1/V=Km/S*Vmax+1/Vmax，Km/Vmax为斜率，1/Vmax为1/V轴交点，-1/Km为1/S交点。当我们在讨论酶催化的底物特异性或者不同辅酶的依赖性时，根据实验数据，采用双倒数法可以求出Km，Vmax，Vmax/Km值。如何表征底物的特异性和辅酶的依赖性？Km是酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度，单位是mol/L，表示酶对底物的亲和力。Km值越小，酶和底物的亲和力越强，酶促反应越容易进行。Vmax单位为U/mg蛋白，Vmax值越大，每毫克蛋白酶的活力越高，酶活力越大。Vmax/Km值为酶催化特定底物时的催化效率的综合衡量标准，该值越大，酶对底物的特异性越强。这是我对Vmax/Km理解，不知道是否正确，请这位高手指教！

eming · 发表于 2012-12-26 20:10:03

Generally, 是这么回事。但是要注意几点：双倒数做图得到的结果是最低限能接受的；Km大多数情况下不等同于Ks，虽然Km能够相对衡量substrate binding affinity，酶促反应是否容易进行，不仅仅取决于substrate binding. Kcat的改变往往是百倍千倍的，Kcat涉及了更过的chemical steps. substrate specifivcity也往往是由于transition state 的改变，而不是ground state binding interactions的变化。

大工-阿里巴巴 · 发表于 2012-12-26 20:16:59

Generally, 是这么回事。但是要注意几点：双倒数做图得到的结果是最低限能接受的；Km大多数情况下不等同于K ...

飞天哥果然是高人，我也得继续努力提高自己的酶动力学基础知识~

墨竹晓风 · 发表于 2012-12-26 20:10:00

Generally, 是这么回事。但是要注意几点：双倒数做图得到的结果是最低限能接受的；Km大多数情况下不等同于K ...

请教飞天哥，双倒数法和prism中的拟合方法，分别适用情况。怎么选择适用于特定体系Km的计算？

eming · 发表于 2012-12-26 23:46:49

请教飞天哥，双倒数法和prism中的拟合方法，分别适用情况。怎么选择适用于特定体系Km的计算？ ...

双倒数法已经很古老了，prism的拟合是一个简单的非线性拟合。现在一般都会选择非线性拟合求Km和Vm，双倒数作图仍然可以出现在paper中，适合说明机理（如抑制，双底物反应机理等等）。prism的拟合我没有用过，但是如果知道你要求什么，可以根据方程，使用任何可以做非线性拟合的软件。我在博客中介绍了使用libreoffice的非线性拟合，以及播客中用Qtiplot做非线性拟合。当然，我还是推荐用gnumeric的solver。

墨竹晓风 · 发表于 2012-12-26 20:10:00

双倒数法已经很古老了，prism的拟合是一个简单的非线性拟合。现在一般都会选择非线性拟合求Km和Vm，双倒 ...

我想做的是，抑制剂对底物的竞争抑制关系，通过Km的变化来表征可以吗？或者是有其他的试验方法？

cuiyoutian · 发表于 2012-12-27 04:06:52

有个低级问题请教....为什么做酶动力学表征的时候一定要纯化出的酶呢?根据拟合,无关和蛋白质纯度啊.

大工-阿里巴巴 · 发表于 2012-12-26 23:46:00

纯度决定了你的比酶活啊~V和比酶活有关而非总酶活，你用双倒数拟合的话不是1/V和1/S的关系吗?哈哈

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