蛋白质磷酸化与非磷酸化后结构与功能的模拟探讨

Charleshen

有一个酶，实验验证了在细胞G1期T214可以高水平磷酸化，我想问下各位有经验的大神，我在体外用大肠杆菌表达了这个酶，竟然也有活性，因此我推测该酶的磷酸化是没有活性的，现在想在体外将该酶的T214给定点磷酸化了，但是好像没有这个技术~~~，定点磷酸化，，，，或者是用什么激酶如PKB将全部的ser和THR给磷酸化呢？有谁做过体外磷酸化 啊？不知道加上PKB，再加上我的酶，再加上ATP。会不会磷酸化呢？求文献啊
第二，用ＤＳ软件虚拟创建磷酸化和非磷酸化的T214该酶，然后跑ＭＤ看看结构的变化？已知该位点不在结合区域！！！但是改为点和对面的氨基酸有很强的氢键，并且绑定形成一个ｌｏｏｐ，这个ｌｏｏｐ处在ＤＮＡ的大沟里
求点意见，这是我的硕士开题，，，我没一点思路。。。。