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蛋白质磷酸化与非磷酸化后结构与功能的模拟探讨

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发表于 2014-3-22 18:16:21 | 显示全部楼层 |阅读模式

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有一个酶,实验验证了在细胞G1期T214可以高水平磷酸化,我想问下各位有经验的大神,我在体外用大肠杆菌表达了这个酶,竟然也有活性,因此我推测该酶的磷酸化是没有活性的,现在想在体外将该酶的T214给定点磷酸化了,但是好像没有这个技术~~~,定点磷酸化,,,,或者是用什么激酶如PKB将全部的ser和THR给磷酸化呢?有谁做过体外磷酸化 啊?不知道加上PKB,再加上我的酶,再加上ATP。会不会磷酸化呢?求文献啊
第二,用DS软件虚拟创建磷酸化和非磷酸化的T214该酶,然后跑MD看看结构的变化?已知该位点不在结合区域!!!但是改为点和对面的氨基酸有很强的氢键,并且绑定形成一个loop,这个loop处在DNA的大沟里
求点意见,这是我的硕士开题,,,我没一点思路。。。。
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